纯氟油（yóu）Fluo-Oil 135(氟油3M Novec HFE7500电子氟化液的替代品)

Fluo-Oil 135（简称FO135） 是一种纯（chún）氟化（huà）油，可用（yòng）于替（tì）换氟油3M Novec HFE7500电子氟化液。 Fluo-Oil 135氟油的化学和物理化学性质与3M Novec HFE7500 相似，如下表所（suǒ）示（shì）:

优势（shì）

生物相容性、可重复性和稳定性。

如何（hé）使用？

氟油Fluo-Oil 135用于稀释FluoSurf Neat表面活性剂或已经用Fluo-Oil 135油稀释（shì）的（de）表面活性剂。

（由于FluoSurf Neat表（biǎo）面活性剂是（shì）一种PFPE-PEG结构的复杂（zá）高效纯表（biǎo）面活（huó）性剂，因为（wéi）类似于（yú）PFPE-PEG结构的纯表面活性（xìng）剂（jì）如（rú）FluoSurf Neat，Surf-Drop，PFPE-PEG-PFPE两嵌段或三嵌（qiàn）段表面活性剂，Surf 含氟表面活性剂等，基（jī）本上都可以使用（yòng）纯氟油Fluo-Oil 135进行（háng）稀（xī）释。稀释的浓度从0.2%到12%之间。）

保存

室温下（xià）避光（guāng）保（bǎo）存

安全注意事项

● 避（bì）免（miǎn）吸入、摄入和接触皮肤和眼睛

● 穿戴（dài）耐化（huà）学腐蚀的个人防（fáng）护装备（bèi）

● 戴上（shàng）合适的（de）手套

● 穿合适的（de）防护服

● 戴侧（cè）护罩的安（ān）全眼镜

与（yǔ）3M HFE7500油产生液滴性能的测（cè）试比较

分别用3M HFE7500和Fluo-Oil 135氟化油稀释FluoSurf neat表面活性剂，得到4w/w%的质量浓（nóng）度（dù）。

水滴产生或油（yóu）包（bāo）水液（yè）滴产（chǎn）生（shēng）的两相流速：

油相流速为（wéi）300μL/hr，水相（xiàng）流（liú）速为（wéi）100μL/hr。

水相为PBS溶（róng）液或100μM荧光素的PBS溶液（用于测试（shì）液滴的泄露）

倒置显微镜观察（chá）和Image J软件分（fèn）析。

一、液滴尺寸及其分布（bù）

在Fluo-Oil 135和HFE7500油中，产生相似尺寸的（de）水滴（dī）。在既（jì）定流速（sù）参（cān）数（shù）下（xià），液滴的平均直（zhí）径为110μm。液滴尺（chǐ）寸的CV分（fèn）别为2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油（yóu））。

二（èr）、液滴稳定性

大多数研（yán）究团队使（shǐ）用液滴（dī）微流体进行细胞封装（zhuāng）或（huò） PCR 应用。 因此（cǐ），需（xū）要通过 PCR 的（de）加热（rè）循（xún）环（huán）以（yǐ）及在 37°C 下长期孵育来产生稳定的液滴。 表面活性剂的选择至关重要，但选择油同（tóng）样重要，以确保可（kě）重复的（de）实（shí）验以（yǐ）及单分散液（yè）滴群（qún）的生成和（hé）保存。

分别从三（sān）个方面测试液滴（dī）的（de）稳定性：一（yī）是把液滴重新（xīn）注入（rù）到玻璃观察腔（qiāng）室内；二是经典的PCR热循（xún）环过程（chéng），循环过程（chéng）30次，每次热循（xún）环为98°C运行10s, 50°C运行5s, 72°C运行10s；三是置于37℃的培养箱内放置3天。对1万个液滴进行分析。

无论是在（zài） Novec™ HFE 7500 还是 Fluo-Oil™ 135 中形（xíng）成 FluoSurf™ 稳（wěn）定（dìng）的液（yè）滴，在 PCR 加（jiā）热循环（huán）后或在 37°C 孵育 3 天后（hòu），液滴平均尺寸在（zài）生（shēng）成时保持不变 [约 110μm (0.7nL)] 。此外，液滴种群仍然是（shì）单分散的。 根据统计（jì）分析，计算出（chū）在加热循（xún）环（huán）后，只有（yǒu） 5% 的整体（tǐ）液滴的大小与平（píng）均初始液滴直径的差异超过 10%。

将氟化油（yóu）从 Novec™ HFE 7500 切（qiē）换到 Fluo-Oil™ 135 对液滴稳定性没有影响。

三、液滴内的（de）分子（zǐ）滞（zhì）留

基于液滴的化学或（huò）生（shēng）化分（fèn）析依赖于试剂在单个（gè）液滴（dī）中（zhōng）保持隔离。 泄（xiè）漏到（dào）连续相（xiàng）和液滴之间的交换，即使很低，也会影（yǐng）响结果的完整性，因此，分子保（bǎo）留（liú）是选择氟化油时要考虑的重要参（cān）数。 众所周知，氟（fú）化油会限制液滴之间（jiān）的分子交换，因此应验证切换油（yóu）的（de）影响。

同时生成两种油包（bāo）水乳液[“空”（负（fù）载 PBS）和“满（mǎn）”（负载荧光素）液滴]，一次使用 Novec™ HFE7500，然（rán）后使用 Fluo-Oil™ 135 作（zuò）为连续相（xiàng）。 两种混（hún）合物，每（měi）一种都包（bāo）含两（liǎng）个种群，在 37°C 下孵育，并在不（bú）同的时间点拍摄照片（piàn）。 使用 ImageJ 软件对（duì）液滴内荧（yíng）光强（qiáng）度的演变（biàn）进行（háng）了统计定量分析。

上图显示（shì）了两（liǎng）个群体之间平均荧光强度差异的（de）演变（染料加载和空液（yè）滴）以及在初始（shǐ）时间点和 48 小（xiǎo）时后（hòu）相关的荧光和明（míng）场图片。

在 24 小时的过程中，两种氟化油产生的（de）液滴中荧光素的泄（xiè）漏（lòu）率相（xiàng）似（约 15% 泄漏），并（bìng）且在 Fluo-Oil™ 135 中（zhōng）产生液滴的情况下保持恒定 3 天。相反（fǎn），在 24 小时后， Novec™ HFE7500 中液滴的泄漏继续减少并达到 30% 左右（yòu）。 这（zhè）种较长孵（fū）育时间（jiān）的较差保留性能可归因于后一种油的粘度略低，加速了（le）液滴（dī）之间更快的分子（zǐ）交换。

结论

对于基于（yú）液滴的微流体应用，从一种氟化油类型切换到另一（yī）种（zhǒng）类（lèi）型可（kě）能会对微流体实验的过程产生重大影响，尤其是对液滴的有效（xiào）生成产生重大影响。 在氟（fú）油3M Novec™ HFE7500电子氟化液 和 氟油（yóu）Fluo-Oil™ 135 的情况下，已证实更换这（zhè）两种氟化油对（duì）实验条件（jiàn）和（hé）结果没有影（yǐng）响。 当使用 Fluo-Oil™ 135 作（zuò）为（wéi）连续相时（shí），甚至（zhì）可（kě）以观察到荧光素（sù）在（zài）液滴内（nèi）的（de）更好保留。

氟（fú）化油Fluo-Oil™ 135 是用于液滴微流体应用（yòng）的3M Novec™ HFE7500 氟油 的有效替代（dài）品。